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　　2、代理机构 成都高远知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 51222 代理人 李高峡 迭名 .“海马枸杞子炖公鸡” .中国菜 谱网 .http:/ eae885ace553dd75.html,2007, 迭名 .“海马枸杞子炖公鸡” .中国菜 谱网 .http:/ eae885ace553dd75.html,2007, (54) 发明名称 一种具有保健功能的组合物及其制备方法 (57) 摘要 本发明提供了一种具有保健功能的组合物， 它是由下述重量配比的原料而备而成的制剂 ： 海 马 1-5 份、 文昌鸡 5-30 份、 枸杞 1-10 份。本发明 还提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发 明

　　3、将养殖海马与海南本地所产的文昌鸡结合， 通 过酶水解制得口服液， 服用方便 ； 两者都富含蛋 白质类成分和多种营养成分不饱和脂肪酸， 具有 补肝益肾、 壮阳安神、 活血祛瘀、 舒筋活络、 止喘平 喘、 益精明目等功用， 是良好的补益佳品。 (66)本国优先权数据 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 万新 权利要求书 2 页 说明书 13 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 2 页 说明书 13 页 1/2 页 2 1. 一种具有保健功能的组合物， 其特征在于 ： 它是由下述重量配比的原料制备而成的 制剂 ： 海马 1-5 份、 文昌鸡 5-30

　　4、 份、 枸杞 1-10 份 ； 制备方法如下 ： 取文昌鸡， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 ； 称重， 置高压锅内加 6-10 倍量蒸馏水和按鸡肉 重量计5%的枸杞， 加压煎煮， 过滤， 得鸡汁， 置冰箱冷藏， 去油， 加热浓缩为1:4的浓缩液 ； 处 理滤渣， 将鸡肉和骨头分离， 鸡肉捣碎备用 ； 取海马粉， 加 8-12 倍量蒸馏水煎煮， 过滤， 获取海马汁和海马渣 ； 取海马渣和步骤 （1） 的捣碎鸡肉按 1: （5-30） 比例混合， 加入 2-6 倍量蒸馏水， 以物重 计， 加 0.8% 蛋白酶或脂肪酶， 酶活力 80 万 U/g， 搅匀， 用 5% 的氢氧化钙试液调 pH6.0-

　　5、10.0， 在 40-60水浴锅内水解 3-8 小时， 取出， 于 80-100水浴灭酶， 用滤布过滤， 弃去滤渣， 得 酶解液 ； 将步骤 （1） 的鸡汁浓缩液和步骤 （2） 的海马汁按重量配比为 （5-30） :1 比例混合得 混合液 ； 将和两种溶液混合， 加入药学上或保健品上可接受的辅料制备成常用的制剂， 其中， 所述的制剂是口服液、 片剂、 胶囊剂、 丸剂或颗粒剂。 2. 根据权利要求 1 所述的组合物， 其特征在于 ： 原料的重量配比为 ： 海马 1 份、 文昌鸡 20 份、 枸杞 1 份。 3. 根据权利要求 1 所述的组合物， 其特征在于 ： 步骤所述的蛋白酶为动物蛋白水解 酶

　　6、、 木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶。 4. 一种制备权利要求 1-3 任一项所述的组合物的方法， 包括如下步骤 ： a、 称取重量配比的原料 ： 海马 1-5 份、 文昌鸡 5-30 份、 枸杞 1-10 份 ； b、 取文昌鸡， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 ； 称重， 置高压锅内加 6-10 倍量蒸馏水和按鸡肉 重量计5%的枸杞， 加压煎煮， 过滤， 得鸡汁， 置冰箱冷藏， 去油， 加热浓缩为1:4的浓缩液 ； 处 理滤渣， 将鸡肉和骨头分离， 鸡肉捣碎备用 ； c、 取海马粉， 加 8-12 倍量蒸馏水煎煮， 过滤， 获取海马汁和海马渣 ； d、 取海马渣和 b 步骤的捣碎鸡肉按 1:（5-3

　　7、0） 比例混合， 加入 2-6 倍量蒸馏水， 以物重 计， 加 0.8% 蛋白酶或脂肪酶， 酶活力 80 万 U/g， 搅匀， 用 5% 的氢氧化钙试液调 pH6.0-10.0， 在 40-60水浴锅内水解 3-8 小时， 取出， 于 80-100水浴灭酶， 用滤布过滤， 弃去滤渣， 得 酶解液 ； e、 将 b 步骤的鸡汁浓缩液和 c 步骤的海马汁按重量配比为 （5-30） :1 比例混合得混合 液 ； f、 将和两种溶液混合， 加入0.2%的山梨酸钾和1.5%蜂蜜搅匀， 置冰箱冷藏， 过滤， 灌装， 置高压消毒器内加压灭菌， 即得成品。 5. 根据权利要求 4 所述的组合物的方法， 其特征

　　8、在于 ： 包括如下步骤 ： a、 称取重量配比的原料 ： 海马 1 份、 文昌鸡 20 份、 枸杞 1 份 ； b、 取文昌鸡解冻， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 ； 称重， 置高压锅内加 8 倍量蒸馏水和按鸡 权 利 要 求 书 CN 101779791 B 2 2/2 页 3 肉重量计 5% 的枸杞， 加压 30 分钟， 过滤， 得鸡汁， 置冰箱冷藏， 去油， 加热浓缩为 1:4 的浓缩 液 ； 处理滤渣， 将鸡肉和骨头分离， 鸡肉捣碎备用 ； c、 取海马粉， 称重， 置直身锅内， 加 10 倍量蒸馏水， 煮 1 小时， 用滤布过滤， 获取海马汁 和海马渣 ； d、 取海马渣和鸡肉按

　　9、1:20 比例混合， 加 4 倍量蒸馏水， 以物重计， 加 0.8% 的动物蛋白 水解酶、 木瓜蛋白酶、 脂肪酶或菠萝蛋白酶中的一种搅匀， 用 5% 的氢氧化钙试液调 pH7.0， 在 50水浴锅内水解 5 小时， 取出， 于 100沸水浴灭酶 5 分钟， 过滤， 弃去滤渣， 得酶解液 ； e、 将鸡汁浓缩液和海马汁按原料 20:1 比例混合得混合液 ； f、 将和两种溶液混合， 加入0.2%的山梨酸钾和1.5%蜂蜜搅匀， 置冰箱冷藏， 过滤， 灌装， 置高压消毒器内加压灭菌， 即得成品。 6. 权利要求 1-3 任意一项所述的组合物在制备具有激素样作用的药物或保健品中的 用途。 7. 权利要

　　10、求 1-3 任意一项所述的组合物在制备具有抗氧化的药物或保健品中的用途。 8. 权利要求 1-3 任意一项所述的组合物在制备具有保肝作用的药物或保健品中的用 途。 9. 权利要求 1-3 任意一项所述的组合物在制备具有止咳作用的药物或保健品中的用 途。 权 利 要 求 书 CN 101779791 B 3 1/13 页 4 一种具有保健功能的组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种具有保健功能的组合物及其制备方法， 属食品领域。 0002 背景技术 0003 海马是我国传统名贵海洋中药材， 具有温肾壮阳， 散结消肿的作用。现代研究海 马具有较高的营养和药用价值以及多种化学活性成分

　　11、， 蛋白质含量高达 70以上， 还有脂 肪酸及酯类成分， 甾体类化合物， 磷脂类成分及多种无机元素等， 认为海马具有抗衰老药理 作用。鸡为传统的补品， 鸡肉富含的蛋白质， 比其他肉类要多， 而脂肪的含量则比其他肉类 要少， 是心脑血管病人的理想食品， 祖国医学认为， 鸡肉有湿中益气补虚填精， 益五脏、 健脾 胃， 治血脉及强筋骨之功效。 现代研究表明鸡精口服液中含有丰富的营养成分， 含有多种氨 基酸、 蛋白质和维生素等， 其作用广泛， 研究发现鸡精有助于食物中铁质的吸收和利用、 还 具有抗压的效果、 有助于控制糖尿病人的血糖含量、 可提高新陈代谢以及具有补血作用。 文 昌鸡是一种优质育肥鸡，

　　12、因产于海南省文昌县而得名。文昌鸡的特点是个体不大， 重约 1.5 千克左右， 毛色鲜艳， 翅短脚矮， 身圆股平， 皮薄滑爽， 肉质肥美， 是海南传统四大名菜之一， 素以皮薄而酥、 肉嫩骨软，“色、 味、 形” 俱佳而驰名中外。 0004 目前尚没有将海马、 文昌鸡配伍制备成保健品或药品的相关文献报道。 0005 发明内容 0006 本发明的技术方案是提供了一种具有保健功能的组合物， 本发明的另一技术方案 是提供了该药物组合物的制备方法。 0007 本发明提供了一种具有保健功能的组合物， 它是由下述重量配比的原料制备而成 的制剂 ： 0008 海马 1-5 份、 文昌鸡 5-30 份、 枸杞 1

　　13、-10 份。 0009 进一步优选地， 原料的重量配比为 ： 0010 海马 1 份、 文昌鸡 20 份、 枸杞 1 份。 0011 其中， 它是由以下步骤制备而成的制剂 ： 0012 (1) 取文昌鸡， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 ； 称重， 置高压锅内加 6-10 倍量蒸馏水和 按鸡肉重量计 5的枸杞， 加压煎煮， 过滤， 得鸡汁， 置冰箱冷藏， 去油， 加热浓缩为约 1 4 的浓缩液 ； 处理滤渣， 将鸡肉和骨头分离， 鸡肉捣碎备用 ； 0013 (2) 取海马粉， 加 8-12 倍量蒸馏水煎煮， 过滤， 获取海马汁和海马渣 ； 0014 (3) 取海马渣和步骤 (1) 的捣碎鸡肉按

　　14、 1 (5-30) 比例混合， 加入 2-6 倍量蒸馏 水， 以物重计， 加 0.8蛋白酶或脂肪酶， 酶活力 80 万 U/g， 搅匀， 用 5的氢氧化钙试液调 pH6.0-10.0， 在 40-60水浴锅内水解 3-8 小时， 取出， 于 80-100水浴灭酶， 用滤布过滤， 弃去滤渣， 得酶解液 ； 0015 (4)将步骤(1)的鸡汁浓缩液和步骤(2)的海马汁按重量配比为(5-30)1比例 混合得混合液 ； 0016 (5) 将和两种溶液混合， 加入药学上或保健品上可接受的辅料制备成常用的 制剂， 其中， 所述的制剂是口服液、 片剂、 胶囊剂、 丸剂或颗粒剂。 说 明 书 CN 10177

　　15、9791 B 4 2/13 页 5 0017 其中， 步骤 (3) 所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶、 木瓜蛋白酶、 菠萝蛋白酶或纤维 复合酶。进一步优选地， 步骤 (3) 所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶。 0018 本发明还提供了一种制备所述的组合物的方法， 包括如下步骤 ： 0019 a、 称取重量配比的原料 ： 0020 海马 1-5 份、 文昌鸡 5-30 份、 枸杞 1-10 份 ； 0021 b、 取文昌鸡， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 ； 称重， 置高压锅内加 6-10 倍量蒸馏水和按 鸡肉重量计 5的枸杞， 加压煎煮， 过滤， 得鸡汁， 置冰箱冷藏， 去油， 加热浓缩为约 1 4

　　16、 的 浓缩液 ； 处理滤渣， 将鸡肉和骨头分离， 用将鸡肉捣碎备用 ； 0022 c、 取海马粉， 加 8-12 倍量蒸馏水煎煮， 过滤， 获取海马汁和海马渣 ； 0023 d、 取海马渣和 b 步骤的捣碎鸡肉按 1 (5-30) 比例混合， 加入 2-6 倍量蒸馏水， 以物重计， 加 0.8蛋白酶， 酶活力 80 万 U/g， 搅匀， 用 5的氢氧化钙试液调 pH6.0-10.0， 在 40-60水浴锅内水解 3-8 小时， 取出， 于 80-100水浴灭酶， 用滤布过滤， 弃去滤渣， 得 酶解液 ； 0024 e、 将 b 步骤的鸡汁浓缩液和 c 步骤的海马汁按重量配比为 (5-30) 1

　　17、 比例混合 得混合液 ； 0025 f、 将和两种溶液混合， 加入 0.2的山梨酸钾和 1.5蜂蜜搅匀， 置冰箱冷 藏， 过滤， 灌装， 置高压消毒器内加压灭菌， 即得成品。 0026 进一步优选地， 该工艺包括如下步骤 ： 0027 a、 称取重量配比的原料 ： 0028 海马 1 份、 文昌鸡 20 份、 枸杞 1 份 ； 0029 b 、 取文昌鸡解冻， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 ； 称重， 置高压锅内加 8 倍量蒸馏水 和按鸡肉重量计 5的枸杞， 加压 30 分钟， 过滤， 得鸡汁， 置冰箱冷藏， 去油， 加热浓缩为约 1 4 的浓缩液 ； 处理滤渣， 将鸡肉和骨头分离， 将鸡肉

　　18、捣碎备用 ； 0030 c、 取海马粉， 称重， 置直身锅内， 加 10 倍量蒸馏水， 煮 1 小时， 用滤布过滤， 获取海 马汁和海马渣 ； 0031 d、 取海马渣和鸡肉按 1 20 比例混合， 加 4 倍量蒸馏水， 以物重计， 加 0.8的动 物蛋白水解酶、 木瓜蛋白酶、 脂肪酶、 菠萝蛋白酶或纤维复合酶中的一种搅匀， 用 5的氢氧 化钙试液调pH7.0， 在50水浴锅内水解5小时， 取出， 于100沸水浴灭酶5分钟， 过滤， 弃 去滤渣， 得酶解液 ； 0032 e、 将鸡汁浓缩液和海马汁按原料 20 1 比例混合得混合液 ； 0033 f、 将和两种溶液混合， 加入 0.2的山梨酸钾

　　19、和 1.5蜂蜜搅匀， 置冰箱冷 藏， 过滤， 灌装， 置高压消毒器内加压灭菌， 即得成品。 0034 进一步优选地， d 步骤所述的蛋白酶为动物蛋白水解酶。 0035 本发明提供了所述的组合物在制备具有激素样作用的药物或保健品中的用途。 0036 本发明提供了所述的药物或保健品是对雌激素、 雄激素缺乏症具有预防或 / 和治 疗作用的药物或保健品。 0037 本发明提供了所述的组合物在制备具有抗氧化、 保肝作用的药物或保健品中的用 途。 0038 本发明提供了所述的组合物在制备具有止咳作用的药物或保健品中的用途。 说 明 书 CN 101779791 B 5 3/13 页 6 0039 本发明将

　　20、养殖海马与海南本地所产的文昌鸡结合， 通过酶水解制得口服液， 服用 方便 ； 两者都富含蛋白质类成分和多种营养成分不饱和脂肪酸， 具有补肝益肾、 壮阳安神、 活血祛瘀、 舒筋活络、 止喘平喘、 益精明目等功用， 是良好的补益佳品。 具体实施方式 0040 本发明使用的蛋白酶和脂肪酶分别购自以下厂家 ： 动物蛋白水解酶、 木瓜蛋白酶、 菠萝蛋白酶购自南宁庞博生物工程有限公司 ； 脂肪酶购自南宁东恒华道生物科技有限责任 公司 ； 纤维复合酶购自上海戴迪实业发展有限公司。 0041 实施例 1 本发明海马鸡精的中间体的制备 0042 取原料海马 10g、 文昌鸡 200g、 枸杞 10g ； 004

　　21、3 a、 原料鸡处理 ( 解冻， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 )， 称重， 置高压锅内加 8 倍量蒸馏 水和鸡肉重量的 5枸杞， 加压 30 分钟， 过滤， 将鸡肉和骨头分离， 将鸡肉捣碎备用， 鸡汁置 冰箱冷藏 24 小时， 去油， 加热浓缩为约 1 4 的浓缩液 ； 0044 b、 取海马粉， 称重， 置直身锅内， 加 10 倍量蒸馏水， 煮 1 小时， 用尼绒滤布过滤， 海 马汁和海马渣 ； 0045 c、 取海马渣和鸡肉按 1 20 比例混合， 加 4 倍量蒸馏水， 以物重计， 加 0.8动物 蛋白水解酶搅匀， 用5的氢氧化钙试液调pH7.0， 在50水浴锅内 水解5小时， 取出，

　　22、 调节 水浴锅温度 100灭酶 5 分钟， 用滤布过滤， 得酶解液和滤渣。 0046 d、 将鸡汁浓缩液和海马汁按 20 1 比例混合得混合液 ； 0047 e、 将和两种溶液混合， 即得。 0048 实施例 2 本发明海马鸡精的中间体的制备 0049 取原料海马 50g、 文昌鸡 300g、 枸杞 100g ； 0050 a、 原料鸡处理 ( 解冻， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏 )， 称重， 置高压锅内加 6 倍量蒸馏 水和鸡肉重量的 5枸杞， 加压 30 分钟， 过滤， 将鸡肉和骨头分离， 用捣碎机将鸡肉捣碎， 鸡 汁置冰箱冷藏 24 小时， 去油， 加热浓缩为约 1 4 的浓缩液 ；

　　23、 0051 b、 取海马粉， 称重， 置直身锅内， 加8倍量蒸馏水， 煮1小时， 用尼绒滤布过滤， 海马 汁和海马渣 ； 0052 c、 取海马渣和鸡肉按 1 30 比例混合， 加 2 倍量蒸馏水， 以物重计， 加 0.8木瓜 蛋白酶搅匀， 用5的氢氧化钙试液调pH10.0， 在60水浴锅内水解8小时， 取出， 调节水浴 锅温度 100灭酶 5 分钟， 用滤布过滤， 得酶解液和滤渣。 0053 d、 将鸡汁浓缩液和海马汁按 30 1 比例混合得混合液 ； 0054 e、 将和两种溶液混合， 即得。 0055 实施例 3 本发明海马鸡精的中间体的制备 0056 取原料海马 10g、 文昌鸡 50

　　24、g、 枸杞 10g ； 0057 a、 原料鸡处理(解冻， 去皮、 头、 肥肉、 爪及内脏)， 称重， 置高压锅内加10倍量蒸馏 水和鸡肉重量的 5枸杞， 加压 30 分钟， 过滤， 将鸡肉和骨头分离， 用捣碎机将鸡肉捣碎， 鸡 汁置冰箱冷藏 24 小时， 去油， 加热浓缩为约 1 4 的浓缩液 ； 0058 b、 取海马粉， 称重， 置直身锅内， 加 12 倍量蒸馏水， 煮 1 小时， 用尼绒滤布过滤， 海 马汁和海马渣 ； 说 明 书 CN 101779791 B 6 4/13 页 7 0059 c、 取海马渣和鸡肉按15比例混合， 加6倍量蒸馏水， 以物重计， 加0.8木瓜蛋 白酶搅匀，

　　25、 用 5的氢氧化钙试液调 pH6.0， 在 40水浴锅内水解 3 小时， 取出， 调节水浴锅 温度 80灭酶 5 分钟， 用滤布过滤， 得酶解液和滤渣。 0060 d、 将鸡汁浓缩液和海马汁按 5 1 比例混合得混合液 ； 0061 e、 将和两种溶液混合， 即得。 0062 实施例 4 本发明口服液的制备 0063 将实施例1所得的中间体1000ml， 加入蔗糖20g， 精滤， 用蒸馏水补充至1000ml， 灌 装， 灭菌， 即得。 0064 实施例 5 本发明片剂的制备 0065 将实施例 2 所得的中间体 1000ml， 浓缩成稠膏 ( 相对密度约 1.10， 60测 )， 加入 淀粉

　　26、20g， 混匀， 制粒， 干燥， 整粒， 加入硬酯酸镁 0.5g， 压片， 即得普通片剂。 0066 实施例 6 本发明胶囊剂的制备 0067 将实施例 3 所得的中间体 1000ml， 浓缩成稠膏 ( 相对密度约 1.10， 60测 )， 加入 淀粉 20g， 混匀， 制粒， 干燥， 整粒， 装入硬胶囊中， 即得胶囊剂。 0068 实施例 7 本发明胶囊剂的制备 0069 将实施例1所得的中间体1000ml， 喷雾干燥成粉末， 加入微晶纤维素10g， 混匀， 制 粒， 干燥， 整粒， 装入硬胶囊中， 即得胶囊剂。 0070 实施例 8 本发明颗粒剂的制备 0071 将实施例 1 所得的中间体

　　27、 1000ml， 浓缩成稠膏 ( 相对密度约 1.10， 60测 )， 加入 淀粉 20g， 蛋白糖 2g 混匀， 制粒， 干燥， 整粒， 即得颗粒剂。 0072 实施例 9 本发明颗粒剂的制备 0073 将实施例 1 所得的中间体 1000ml， 喷雾干燥成粉末， 加入微晶纤维素 10g， 蛋白糖 2g 混匀， 制粒， 干燥， 整粒， 即得颗粒剂。 0074 实施例 10 本发明丸剂的制备 0075 将实施例 1 所得的中间体 1000ml， 浓缩成稠膏 ( 相对密度约 1.10， 60测 )， 加入 微粉硅胶 10g， 混合均匀， 采用塑制法搓条、 轧丸、 整粒、 干燥， 制备成丸剂。 0

　　28、076 实施例 11 本发明凝胶膏剂的制备 0077 将实施例1所得的中间体1000ml， 加入溶胀的龟苓膏粉基质40g， 加入2的蔗糖， 0.2的山梨酸钾， 充分混匀， 煮沸灭菌， 与上述溶液合并混匀， 加水至全量， 趁热装入容器 中， 即得凝胶膏剂。 0078 实施例 12 本发明乳剂的制备 0079 将实施例 1 所得的中间体 1000ml 浓缩至约 500ml， 加入鲜牛奶 500ml 及混合糖浆 (含蔗糖、 蔗糖酯、 单甘酯、 EDTA-2Na、 CMC、 明胶)在容器中搅拌混合， 加热至约60， 用匀浆 机匀浆。匀浆后于 85保温 5 分钟， 趁热灌装， 封口， 灭菌即可。 008

　　29、0 实施例 13 本发明海马鸡精制备过程中酶解工艺中酶的选择试验 0081 选用动物蛋白水解酶、 木瓜蛋白酶、 脂肪酶、 菠萝蛋白酶、 纤维复合酶， 用量均为 0.8， 在其它条件不变的情况下， 进行酶解。取酶解液进行检测， 评价指标为蛋白水解度、 总 N 的含量。 0082 1、 检测方法 ： 说 明 书 CN 101779791 B 7 5/13 页 8 0083 (1) 蛋白水解度的评价 ： 采用中性甲醛滴定法。 0084 取饮品液或酶解液 5ml 于小烧杯中， 加入 60ml 熬制去 CO2水， 磁力搅拌并用精密 pH 指示其 pH 值。先用 0.05mol/L 标准 NaOH 滴定

　　31、g 与 30硫酸铜溶液 5 滴， 再沿瓶壁滴加硫酸 2.0ml ； 在凯氏烧瓶口放一小漏斗， 并使烧瓶成 45斜置， 用小火缓缓加热使溶液保持在沸 点以下， 等泡沸停止， 逐步加大火力， 沸腾至溶液成澄明的绿色后， 除另有规定外， 继续加热 10 分钟， 放冷， 加水 2ml。 0087 取 2硼酸溶液 10ml， 置 100ml 锥形瓶中， 加甲基红溴甲酚绿混合指示液 5 滴， 将冷凝管尖端插入液面下。然后， 将凯氏烧瓶中内容物经由 D 漏斗转入 C 蒸馏瓶中， 用水少 量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次， 再加入 40氢氧化钠溶液 10ml， 用少量水再洗漏斗数次， 关 G 夹， 加热 A 瓶进行蒸

　　32、气蒸馏， 至硼酸液开始由酒红色变为蓝绿色时起， 继续蒸馏约 10 分钟 后， 将冷凝管尖端提出液面， 使蒸气继续冲洗约 1 分钟， 用水淋洗尖端后停止蒸馏。 0088 馏出液用硫酸滴定液 (0.005mol/L) 滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色， 并将滴定 的结果用空白试验 ( 空白和供试品所得馏出液的容积应基本相同， 约 70 75ml) 校正。每 1ml 硫酸滴定液 (0.005mol/L) 相当于 0.1401mg 的 N。 0089 取用的供试品如在 0.1g 以上时， 应适当增加硫酸的用量， 使消解作用完全， 并相 应地增加 40氢氧化钠溶液的用量。 0090 2、 检测结果 ： 00

　　33、91 表 1 几种酶对酶解结果的影响 0092 0093 结果表明， 从表可知， 动物蛋白水解酶的酶解效果较好， 因此优选动物蛋白水解酶 作为酶解用酶。 0094 以下通过口感对比试验证明本发明的有益效果。 0095 试验例 1 海马鸡精口服液口感实验 0096 选取市售两种鸡精口服液， 与海马鸡精口服液 ( 由实施例 4 制备 ) 进行口感比较。 说 明 书 CN 101779791 B 8 6/13 页 9 实验参与人员 45 人， 采用双盲法。 0097 表 2 海马鸡精口服液及市售两种鸡精的口感比较 0098 0099 注 ：“-” 表示口感较差 ；“+” 表示口感一般 ；“+” 表示

　　34、口感较好。 0100 结果表明， 海马鸡精口服液口感较好。 0101 以下通过具体功效学试验证明本发明的有益效果。 0102 试验例 2 海马鸡精口服液功能评价 0103 实验材料及药品 ： 0104 人参北芪片 ( 哈药集团世一堂制药厂 ) ； 17- 雌二醇 ( 上海亚培生物科技有 限公司 ) ； 醋酸氢化可得松 ( 浙江仙琚制药股份有限公司 )， 他莫昔芬 ( 北京恒业中远化 工有限公司 ) ； 己烯雌酚 ( 合肥久联制药有限公司 )， DMEM 培养基 (GIBCO Invitrogen Corporation)， 小牛血清 ( 杭州四季青生物工程材料有限公司 )， 青链酶素 ( 华北

　　35、制药股份 有限公司)， 胰酶(华美生物工程公司) ； MTT(美国Sigma公司) ； 刀豆蛋白(上海博升生物 科技有限公司 ) ； MCF-7 细胞 ( 中国典型培养物保藏中心 ) ； 急支糖浆 ( 太极集团涪陵制药 厂) ； 海马鸡精口服液(海南龙盛生物科技发展有限公司)， 海马鸡精口服液经冷冻干燥， 干 燥粉供体外实验用。体内实验用海马鸡精口服液直接灌胃。 0105 实验仪器 0106 培养箱 ( 宁波莱福科技有限公司 )， CO2培养箱 (SHELVJB) ； 摇床 ( 中国哈尔滨市 东联电子技术开发有限公司 ) ； 离心机 ( 上海安亭科学仪器厂 ) ； 冻干机 (LABCONCO)

　　36、 ； 酶标 仪 (TYPE1500-458) 0107 一、 性激素样作用 0108 1、 雌激素作用 0109 取对数生长期 MCF-7 细胞 ( 人乳腺癌细胞， 对雌激素敏感 )， 用 DMEM 培养基 ( 含 10小牛血清， 青莲酶素)培养， 细胞用0.25的胰酶消化， 调整细胞浓度至1104个/ml， 接种于 96 孔板， 培养 24 小时让其贴壁。然后将培养基换成无酚红的培养基， 然后加入样 品溶液， 海马鸡精口服液设 3 个浓度 (50， 20， 10g/ml)， 每个浓度设六个复孔。阳性对照 ： E2(17- 雌二醇 ) 设 2 个浓度 (10-9， 10-10M)， 在培养箱中

　　38、加入雌二醇共培养， 用 MTT 法测定细 胞增殖。 0116 表 4 海马鸡精 17- 雌二醇条件下对 MCF-7 细胞增殖作用的影响 0117 0118 与模型组相比 *P 0.01 0119 结果显示， 海马鸡精高剂量时对雌激素有一定拮抗作用， 低剂量时与雌激素有协 同作用， 能增强雌激素对乳腺细胞的增殖作用。 0120 3、 酵母双杂交 0121 转基因酵母接种在培养皿上， 放入培养箱 30培养， 无菌取 10ml SD 培养基加入 L 形试管， 接种培养皿中生长良好的酵母进行前培养， 放入摇床 30过夜， 转化生长。然后 加药培养 ： 于 1.5mlEP 管中加入 200l 新 SD

　　39、培养基， 再加入 50l 前培养液， 加入药物 2.5l(3个浓度)继续在培养在摇床上30培养4h。 取150l放入96孔板， 于595nm(或 600nm) 测 OD 值作为细胞密度。EP 管放入离心机， 12000rpm， 离心 5min。小心吸去上清液， 加入 200lZ 缓冲液中， 振匀， 37温育 15min 使酵母破壁。取出， 吸干外表水， 然后加入 40l 4mg/ml浓度的2-硝基苯-D-半乳糖苷开始酶促反应。 30min后取出， 吸干外表水， 加入 100l1MNa2CO3停止反应。取 150l 加入 96 孔板中测定酶活性。以酶活表示药物与 雌激素受体 、 的结合能力。 0

　　40、122 表5酵母双杂交系统中海马鸡精对-半乳糖苷酶的诱导作用的影响(-受体) 说 明 书 CN 101779791 B 10 8/13 页 11 0123 0124 与空白组相比 *P 0.01。 0125 结果显示， 海马鸡精内在成分具有与雌激素 - 受体结合的能力。表 6 酵母双杂 交系统中海马鸡精对 - 半乳糖苷酶的诱导作用的影响 (- 受体 ) 0126 0127 与空白组相比 *P 0.01。 0128 结果显示， 海马鸡精内在成分具有与雌激素 受体结合的能力。能通过与雌激素 受体结合而产生雌激素作用。 0129 4、 对小鼠子宫系数及血清雌激素含量的影响 0130 取昆明雌性幼鼠

　　41、50 只， 分为五组， 模型组给予己烯雌酚， 空白对照给予生理盐水， 适应性饲养两天后开始给药六天后处理， 眼球取血， 分离血清， 测雌激素含量， 剥离子宫并 称重， 计算子宫系数。 0131 表 7 海马鸡精对小鼠子宫重量及血清中雌激素含量的影响 0132 说 明 书 CN 101779791 B 11 9/13 页 12 0133 与空白组相比 *P 0.05，*P 0.01。 0134 结果显示， 海马鸡精能增加小鼠子宫重量， 减少血清中雌激素含量， 具有雌激素作 用。 0135 5、 对肾上腺皮质激素型阳虚模型的影响 0136 取昆明种雄性小鼠， 体质量25-35g， 随机分为6组，

　　42、每组20只， 其中， 正常组不作任 何处理 ； 其他4组， 以醋酸氢化可得松25mg/kg， 连续注射8天， 造成阳虚模型， 注射后0.5h， 对照组灌胃给予饮用水 0.4mL/ 只， 小、 中、 大剂量组分别灌胃给予海马鸡精口服液、 以人参 片为阳性对照， 连续8d， 每天测定小鼠体重 ； 第9天， 取一半小鼠取血， 测血常规(WBC、 RBC)， 断头处死小鼠， 取胸腺、 脾脏、 肾上腺称重， 计算脏器指数 ( 脏器重量 / 体重 *100)。取一半 小鼠测游泳存活时间 0137 表 8 海马鸡精对阳虚小鼠白细胞、 红细胞和游泳存活时间的影响 0138 0139 与模型相比 *P 0.05

　　45、无水乙醇 0151 Ai 1mLDPPH溶液 +1mL 样品溶液 0152 Aj 1mL 样品溶液 +1mL 无水乙醇 0153 用力摇匀， 将 Ai 所表示的样品在室温下静置 30min 后， 加入比色皿中进行吸光 度的测定， 测出 A0、 Ai、 Aj 所表示样品的吸光度值， 清除率按公式 (1) 计算。SA( ) 1-(Ai-Aj)/A0100(1) 0154 DPPH是一种稳定的自由基， 其结构中含有3个苯环， 1个N原子上有1个孤对电子， 其乙醇溶液呈紫色， 在517nm附近有强吸收， 当DPPH溶液中加入自由基清除剂时， 孤对电子 被配对， 颜色由紫色向黄色变化， 在 517nm

　　46、处的吸光度变小， 而吸光度变小的程度与自由基 被清除的程度呈定量关系， 因而可用分光光度法进行定量分析。 0155 表 11 海马鸡精对 DPPH 自由基的清除作用 (XS， n 5) 0156 说 明 书 CN 101779791 B 13 11/13 页 14 0157 海马鸡精对 DPPH 自由基的清除作用见表 11， 海马鸡精对 DPPH 自由基具有很强 的清除作用， 且呈浓度依赖性。相对于维生素 C(EC50 为 277.85g/ml) 海马鸡精 EC50 为 330.86g/ml， 约是维生素的 1.2 倍。 0158 2.2、 二氧化钛光催化反应体系检测样品清除羟基自由基的能力

　　47、0159 利用二氧化钛光催化反应体系检测样品抑制羟基自由基产生的能力。在 70mL 圆 柱形硬质玻璃瓶中依次加入一定体积 5.010-4mol/L SRB 溶液， 5mg TiO2， 用 HClO4 调节 pH为2.5， 定容至50mL， 置于暗室搅拌30min达到吸附平衡。 在紫外光照射下计时并开始反 应， 于不同时间间隔取样， 离心分离， 紫外可见分光光度计扫描上清液吸收曲线nm 波长处测定吸光度值 Ai。在相同条件下， 测定空白试样 A0( 无 TiO2)， 计算 A A0-Ai。 0160 在该体系中加入适量的 1.010-3mol/L 样品， 其它条件相同， 测定在 12min 的 AS 值， 测定不加清除剂提取物时的AOS计算。 ASAOS-AS， 清除率D()AS/A100 (AOS-AS)/(A0-Ai)100。 0161 表 12 海马鸡精对羟基自由基的清除作用 (XS， n 5) 0162 0163 海马鸡精对羟基自由基的清除作用见表 12， 海马鸡精对 DPPH 自由基具有一定的 清除作用， 且呈浓度依赖性。相对于维生素 C(EC50 为 226.25g/ml) 海马鸡精 EC50 为 271.64g/ml， 约是维生